Иммунологические механизмы действия препарата Цитовир®-3 в основе профилактики острых респираторных вирусных инфекций и гриппа

Рулева Анна Александровна, Попова Варвара Валерьевна, Лёвина Анна Викторовна, Краснов Алексей Александрович, Петленко Сергей Викторович

Лекарственные средства:

Цитовир®-3

Цель работы - изучить иммунологические механизмы действия и безопасность препарата Цитовир®-3 капсулы у здоровых добровольцев при пролонгированном курсе приема.

Материал и методы. Под наблюдением находился 21 человек. Это были здоровые добровольцы в возрасте 18-30 лет. Продолжительность курса приема Цитовир®-3 составила 14 дней по 1 капсуле 3 раза в день. Углубленное обследование добровольцев выполнялось на этапе скрининга, на 5-й день приема препарата и после 14-дневного курса. Безопасность и переносимость оценивали по данным клинического осмотра с фиксацией показателей жизненно важных функций, а также путем исследования в динамике клинического и биохимического анализов крови, общего анализа мочи и показателей иммунологической реактивности организма.

противовирусная активность; Цитовир®-3; здоровые добровольцы; профилактическое действие; врожденный иммунитет; безопасность

Введение

Вирусы гриппа и других острых респираторных вирусных инфекций (ОРВИ) вызывают массовые вспышки инфекционных заболеваний, периодически принимающие характер эпидемий. Грипп и ОРВИ остаются практически неконтролируемыми заболеваниями из-за высокой изменчивости антигенной структуры циркулирующих вирусов гриппа и гетерогенности возбудителей острых респираторных инфекций, насчитывающих более 200 видов. Ущерб, наносимый здоровью населения этими инфекциями и связанными с ними осложнениями, огромен. Естественно, что многие коллективы исследователей настойчиво ищут пути и средства решения этой серьезной проблемы. Создание универсальной вакцины невозможно по ряду объективных причин. Перечень специфических противовирусных препаратов включает лишь несколько наименований, которые имеют возрастные ограничения по использованию и, как правило, являются токсичными и дорогостоящими, и поэтому не могут использоваться при проведении плановой профилактики респираторных инфекций. В связи с вышесказанным весьма актуальны разработка, изучение и совершенствование неспецифических средств противовирусной защиты.

Комплекс Альфа-глутамил-триптофан + Аскорбиновая кислота + Бендазол (Цитовир®-3) - это оригинальный отечественный препарат непрямого противовирусного действия, обладающий комплексным иммунотропным действием. Он используется для профилактики и раннего патогенетического лечения гриппа и ОРВИ уже на протяжении 20 лет. Для лечения и экстренной профилактики (контакт с больным) препарат применяется относительно коротким, 4-дневным, курсом, что при решении данных задач с научнопрактической точки зрения целесообразно и оправданно. При возникновении эпидемической ситуации (относительной угрозе заражения) для достижения более стойкого и длительного защитного эффекта необходимо использовать более продолжительный профилактический курс препарата Цитовир®-3 (так называемая плановая профилактика).

В связи с вышеизложенным цель настоящего исследования - клинико-лабораторная оценка иммунологической активности, безопасности и переносимости препарата Цитовир®-3 капсулы у здоровых добровольцев при пролонгированном курсе приема (14 дней).

Материал и методы

Пострегистрационное клиническое исследование было проведено на базе аккредитованного клинического центра ООО "Медфорт" в г. Санкт-Петербург в 2018 г. по дизайну открытого исследования безопасности и переносимости препарата Альфа-глутамил-триптофан + Аскорбиновая кислота + Бендазол (Цито-вир®-3) (АО "МБНПК "Цитомед", Россия), капсулы, у здоровых добровольцев, согласно правилам ICH GCP и в соответствии с Хельсинкской декларацией. Исследование проведено по протоколу, одобренному локальным этическим комитетом и Минздравом России. Все добровольцы подписали информированное согласие на участие в исследовании.

В исследование были отобраны психосоматически здоровые мужчины в возрасте 18-30 лет (средний возраст - 25,9 ± 2,6 года) без каких-либо жалоб на момент проведения скрининга и не принимающие препараты сопутствующей терапии. Отбор проводили в соответствии с критериями включения/невключения.

Препарат получил 21 человек по схеме 1 капсула 3 раза в день за 30 мин до еды ежедневно в течение 14 дней. Контрольные обследования проходили при скрининге (1-2-й день исследования), до приема препарата в 7-й день - (5-й день приема препарата, что соответствует лечебному курсу приема) и в день 17 и 18 - два дня наблюдения после 14-дневного курса. Дни 3-16 - прием исследуемого препарата. Во время скринингового визита для подтверждения соматического и инфекционного статуса определяли наличие наркотических и сильнодействующих веществ в крови и в моче, паров этанола в выдыхаемом воздухе, маркеров гепатитов В и С, ВИЧ-инфекции и сифилиса.

Влияние Цитовир®-3 на показатели иммунологической реактивности организма оценивали по их изменению в реперных точках исследования: функциональное состояние нейтрофилов и моноцитов по лизосомально-катионному тесту (ЛКТ) [1] и окислительной активности в тесте восстановления нитросинеготетразолия (НСТ-тест), спонтанном и стимулированным зи-мозаном, а также по величине фагоцитарного индекса моноцитов и нейтрофилов, фагоцитирующих E. coli, и уровни сывороточного и секреторного IgA (sIgA), который играет значимую роль в формировании резистентности к возбудителям респираторных инфекций. Для оценки активности лизосомальных катионных белков в ЛКТ, фагоцитарной активности моноцитов и нейтрофилов и в НСТ-тесте использовали метод лазерной проточной цитофлуориметрии на анализаторе "FACSCalibur™ System" (USA), а содержание IgA определяли иммуноферментным методом.

Безопасность оценивали по данным клинического осмотра с фиксацией показателей жизненно важных функций, а также путем исследования в динамике клинического и биохимического анализов крови, общего анализа мочи, электрокардиограммы (ЭКГ). Переносимость препарата оценивали путем ежедневного активного сбора данных (жалоб) у каждого добровольца.

При проведении статистического анализа был использован пакет статистических программ Statistica 12.0 для Windows. За уровень статистической значимости было принято значение p < 0,05. Данные, распределение которых отличалось от нормального, представлены в виде медианы и квартильных интервалов. Для определения степени отличия распределения от нормального был использован критерий Лиллиефорса. Оценку динамики показателей в связи с небольшим объемом выборки проводили с использованием непараметрических критериев Вилкоксона и Мак-Немара. При необходимости использовали поправку Бонферрони на множественность сравнения. Достоверность различий между показателями зависимых групп для параметрических данных с нормальным распределением оценивали с помощью t-критерия Стьюдента для связанных групп.

Результаты

Определение функциональной активности клеток врожденного иммунитета проводили путем оценки фагоцитарной системы. Результаты оценки фагоцитоза моноцитов выявили положительную динамику этого показателя (рис. 1).

Рис. 1. Динамика относительного количества гранулоцитов и моноцитов, фагоцитирующих E. coli, в процессе приема здоровыми добровольцами препарата Цитовир®-3

Скрин. - скрининг, Д7 - День 7, Д17 - День 17.

Здесь и далее: представлены медианы, 25 и 75 % квартили, выбросы значений показателя и размах значений показателя; ** - р < 0,01 по сравнению со значениями при скрининге.

Так, относительное содержание фагоцитирующих моноцитов в ходе приема препарата значимо повышалось к 7-му и 17-му дням исследования (р < 0,01, критерий Вилкоксона) по сравнению с исходными значениями при скрининге.

Показатель фагоцитоза в популяции нейтрофильных гранулоцитов (рис. 1) в период скрининга находился на достаточно высоком уровне и в ходе исследования имел тенденцию к повышению (на 3 %) в течение курсового приема препарата.

Двумя методами проводили оценку влияния препарата на кислород-зависимый и кислород-независимый пути киллинга бактерий (микробицидная активность) по НСТ-тесту и ЛКТ. Окислительную метаболическую активность и свободнорадикальные процессы в фагоцитах периферической крови (НАДФ-Н-оксидазную систему) оценивали по спонтанному и стимулированному НСТ-тесту. Спонтанный НСТ-тест определяет фоновую базальную активность клеток (нейтрофилов, моноцитов), циркулирующих в крови обследованных лиц. Стимулированный НСТ-тест отражает микробицидную способность исследуемых клеток к реагированию на активатор in vitro (и косвенно in vivo).

Исследованная в динамике спонтанная и стимулированная НСТ-активность показала, что Цитовир®-3 не вызывал изменения базального уровня метаболической активности фагоцитов на всем протяжении исследования. Так, медиана спонтанного НСТ-теста при скрининге и на 7-й день исследования составила 92,0 у.е., сохраняясь на том же уровне к 17-му дню исследования -96,0 у.е. (р > 0,05, критерий Вилкоксона). При стимуляции полиморфноядерных нейтрофилов зимозаном наблюдалась линейная зависимость между длительностью курсового приема препарата и уровнем активации метаболизма клеток (рис. 2).

Рис. 2. Динамика показателей стимулированного НСТ-теста полиморфноядерных нейтрофилов в процессе приема здоровыми добровольцами препарата Цитовир®-3

Так, по сравнению с показателями при скрининге стимуляция на 7-й день исследования сопровождалась достоверным увеличением показателя НСТ-теста в 1,6 раза (р < 0,001), на 17-й день исследования ферментативная активность клеток выросла в 2,2 раза (р < 0,001, критерий Вилкоксона).

Микробицидные кислород-независимые факторы нейтрофилов оценивали с помощью цитохимического ЛКТ [1]. Выявлено достоверное повышение активности катионных белков по показателям ЛКТ на 7-й и 17-й день исследования препарата Цитовир®-3 (рис. 3) по сравнению с показателями скрининга (base line control). На 7-й день исследования ЛКТ-активность статистически значимо выросла в 1,6 раз (р < 0,001), а к 17-му дню - в 2,1 раза (р < 0,001, критерий Вилкоксона).

Рис. 3. Динамика ЛКТ-активности полиморфноядерных нейтрофилов в процессе приема здоровыми добровольцами препарата Цитовир®-3

** - р < 0,01 по сравнению с исходными значениями показателя (при скрининге).

Исследование другой популяции фагоцитирующих клеток - моноцитов - показало отсутствие динамики спонтанного НСТ-теста (что может свидетельствовать о безопасности препарата). В ходе исследуемой схемы приема препарата показатель медианы изменялся от 75,0 до 82,0 у.е. (р = 0,404) с дальнейшим ростом к окончанию курса терапии до 88,0 у.е. (р = 0,005). Однако отмеченный рост показателя следует с осторожностью оценивать и экстраполировать на целевую популяцию, поскольку регистрировалось пересечение межквартильных диапазонов как по дням 7-17, так и по дням 2-17, что свидетельствует о сомнительной статистической значимости выявленных различий.

Положительная динамика была отмечена в НСТ-тесте при стимуляции зимозаном: наблюдали достоверное увеличение показателя на 7-й день исследования на 52,9 % (р < 0,001, критерий Вилкоксона) с дальнейшим снижением ферментативной активности к 17-му дню до исходного уровня (р = 0,001) (рис. 4).

Рис. 4. Динамика стимулированного НСТ-теста моноцитов в процессе приема здоровыми добровольцами препарата Цитовир®-3

** - р < 0,01 по сравнению со значениями при скрининге.

Среди многочисленных факторов противовирусной защиты важная роль принадлежит сывороточному IgA, особенно секреторному sIgA слюны [2, 3]. Результаты исследования показали, что на фоне приема препарата Цитовир®-3 происходило статистически значимое увеличение уровня сывороточного IgA на 7-й день исследования (медиана показателя повышалась с 1,33 г/л при скрининге до 1,45 г/л; р < 0,05, критерий Вилкоксона) с последующим снижением к 17-му дню до 1,26 г/л. Естественным является снижение IgA до уровня исходных значений в отсутствие инфекционного агента. В целом изменения показателя в течение профилактического курса не превышали 10 % - вероятно, это нельзя рассматривать как клинически значимое событие.

Кроме того, наблюдали динамику секреторной фракции IgA. Обнаружено увеличение медианы содержания sIgA в слюне от уровня при скрининге к 7-му дню в 1,3 раза - с 55,3 до 72,4 мкг/мл (р < 0,05) - с ее последующим понижением к 17-му дню исследования до исходного уровня - 49,0 мкг/мл (р < 0,05). Полученный результат свидетельствует о клинически значимом увеличении уровня sIgA в слюне.

При сравнении показателей жизненно важных функций на ежедневных визитах не зарегистрировано статистически и клинически значимой динамики ни по одному анализируемому параметру до и после приема препарата. Так, средние значения температуры составили 36,5-36,6 °С, частота пульса - 69,9-71,4 уд/мин, дыхания - 18-19 вдохов/мин. Уровень систолического артериального давления (АД) в течение всего периода наблюдения находился в пределах интервала нормальных значений и составил 112,4-113,8 мм рт.ст. Результаты электрокардиографического исследования, проведенного в 1, 7 и 17-й дни исследования, не показали отклонений, выходящих за пределы среднестатистических значений (данные не представлены).

Большинство показателей клинического и биохимического анализов крови, общего анализа мочи в течение всех вышеперечисленных контрольных точек исследования не имели отклонений от интервалов референсных значений (см. таблицу).

Исследование показателей безопасности на фоне приема препарата Цитовир®-3 у здоровых добровольцев

Примечание. Mean - среднее значение; Std. Dev. - стандартное отклонение; * - р < 0,05 по сравнению с показателями при скрининге. АЛТ - аланинаминотрансфераза; АСТ - аспартатаминотрансфераза; СОЭ - скорость осаждения эритроцитов.

Обнаруженные единичные отклонения некоторых показателей от нормы у ряда добровольцев не являлись клинически значимыми. Так, в ответ на прием Цитовир®-3 не отмечено достоверных статистических различий (р > 0,05, критерий Вилкоксона) в разные сроки исследования в содержании исследуемых биохимических показателей крови (глюкозы, АЛТ, АСТ, общего билирубина, уровня мочевины и креатинина), общего анализа крови, общего анализа мочи (плотность, рН, белок, глюкоза, лейкоциты). Результаты всех исследований не выходили за пределы среднестатистических значений, принятых за физиологическую норму. В общем анализе мочи в динамике (скрининг - 17-й день) было выявлено статистически значимое (р = 0,022) снижение медианы числа эритроцитов в поле зрения на фоне приема препарата Цитовир®-3, которое было расценено как клинически незначимое.

При объективном обследовании добровольцев были зафиксированы 4 жалобы (3 случая головной боли и 1 случай кожного зуда) у 3 добровольцев, которые в рамках клинических исследований трактуются как нежелательные явления (НЯ), что составило 14,3 % обследованных. При анализе зарегистрированных НЯ не получено лабораторных и инструментальных данных, подтверждающих четкую связь с приемом препарата, в связи с чем она была расценена как маловероятная. Все случаи НЯ имели легкую степень, не потребовали назначения медикаментозной терапии и полностью регрессировали самостоятельно в течение одних суток с момента возникновения.

Обсуждение

В данном исследовании была предпринята попытка изучить некоторые аспекты врожденного иммунитета, активируемые препаратом Цитовир®-3, для изучения механизмов противоинфекционной защиты при пролонгированном профилактическом курсе. Ранее в работе К.С. Шипицына и соавт. [4] в плацебо-контролируемом исследовании было показано влияние препарата Цитовир®-3, капсулы на снижение случаев острых респираторных заболеваний, а также на достоверное уменьшение числа бронхитов и пневмоний в сравнении с группой плацебо после однократного профилактического курса.

Влияние препарата на иммунологические параметры было изучено на примере оценки показателей фагоцитарной системы врожденного иммунитета. Как правило, частое и длительное воздействие различных инфекционных агентов (вирусов, грибов и бактерий) приводит к истощению фагоцитарной системы человека и к ее угнетению.

Streptococcus pneumoniae - бактериальный патоген, один из причин развития осложнений сезонных вспышек гриппа, в частности вторичных бактериальных пневмоний, ежегодно вызывает значительную часть заболеваемости и смертности. Исследование G.E. Cooper и соавт. продемонстрировало, что респираторновирусная инфекция макрофагов, исследованная на мышах, зараженных вирусом гриппа и респираторносинцитиальным вирусом, подавляет способность этих клеток фагоцитировать бактерии (S. pneumoniae) [5]. Также в работе Е.В. Араловой и соавт. проанализированы результаты иммунологического обследования детей 1-6 лет с ОРВИ, осложненными острым простым или острым обструктивным бронхитом, в котором выявлено снижение поглотительной функции фагоцитов в 1,1-1,4 раза по сравнению со здоровыми детьми [6].

Клиническая значимость зарегистрированного в нашем исследовании статистически значимого линейного повышения уровня фагоцитоза моноцитов заключается в активации иммунорезистентности к возбудителям респираторных инфекций на фоне приема исследуемого препарата Цитовир®-3. Фагоцитоз полиморфноядерных нейтрофилов у здоровых добровольцев исходно находился на достаточно высоком уровне (95 % при норме до 100 %), что говорит о высокой готовности фагоцитарной системы к встрече с инфекционным агентом. Некоторое повышение показателя относительного количества фагоцитирующих гранулоцитов в динамике в пределах интервала референсных значений свидетельствуют о высоком профиле безопасности длительного курсового приема препарата Цитовир®-3 и о тенденции к активации фагоцитоза исследуемым препаратом.

Вышеописанные данные подтверждаются ранее проведенным К.Ф. Хамидуллиной и соавт. [7] исследованием иммунотропной активности одного из действующих веществ комплексного препарата Цитовир®-3 -тимогена (дипептид глутамил-триптофан). У здоровых добровольцев показано статистически значимое дозозависимое увеличение уровня фагоцитоза нейтрофилов in vitro после 30-минутной инкубации с данным дипептидом - в 2 раза при максимально исследуемой дозировке тимогена.

К одной из ключевых функций фагоцитов крови относится киллинг (дезинтеграция) патогенов, осуществляемый при помощи кислород-зависимых и кислород-независимых микробицидных механизмов. Основой "респираторного взрыва" являются реакции, катализируемые НАДФ-Н-оксидазой, миелопероксидазой и NO-синтазой. В результате этих реакций образуются активные формы кислорода (АФК), высокотоксичные для любых патогенов [8, 9]. В НСТ-тесте определяли влияние препарата на кисло-род-зависимые процессы киллинга, опосредованные НАДФ-Н-оксидазой, определяющие продукцию одной из АФК - супероксид-анион-радикала.

В вышеупомянутой работе Е.В. Араловой и соавт. было отмечено повышение показателей спонтанного НСТ у детей, перенесших ОРВИ, осложненных острым бронхитом, что может говорить о формировании напряженности в системе "респираторного взрыва" фагоцитов после присоединения бактериальной инфекции [6].

По данным О.В. Филинюк и соавт., результаты спонтанного НСТ-теста у больных туберкулезом (лекарственно-чувствительным и лекарственно-устойчивым) не изменялись в процессе лечения и соответствовали нормальным показателям, тогда как показатели индуцированного НСТ-теста демонстрировали существенно сниженные уровни по сравнению со здоровыми донорами как до начала, так и в процессе противотуберкулезной химиотерапии, что, по мнению авторов, на фоне гиперактивации клеток тяжелой инфекцией может быть признаком формирующегося истощения механизмов АФК-зависимого киллинга возбудителя [10].

При иммунологическом обследовании больных с назофарингитами Е.П. Савлевич и соавт. отмечали снижение показателей стимулированного НСТ-теста у преобладающего большинства больных от общепринятых норм и снижение относительного содержания цитотоксических Т-лимфоцитов [11].

При обследовании больных коронавирусной инфекцией А.К. Дуда и соавт. показали снижение основных субпопуляций лимфоцитов, в частности Т-хелперов (р < 0,05), спонтанного и стимулированного НСТ-теста и повышение уровня натуральных киллеров (CD16+-клеток), что может говорить о развитии вторичного иммунодефицита по относительному гиперкиллерному типу при коронавирусных инфекциях с поражением нижних дыхательных путей. При других ОРВИ выявлены те же закономерности, но менее отличающиеся от нормы [12].

Таким образом при респираторных инфекциях наблюдается истощение функционального резерва нейтрофилов и моноцитов, способных к генерации "респираторного взрыва". Подобные структурно-функциональные изменения иммунологической реактивности могут способствовать более тяжелому и осложненному течению первичной инфекции.

Наши результаты спонтанного и стимулированного зимозаном НСТ-теста могут свидетельствовать о том, что препарат Цитовир®-3 не изменяет фоновый уровень активности фагоцитов. В то же время он достоверно повышает резервную метаболическую емкость нейтрофилов, проявляя способность усиливать "респираторный взрыв" при наличии инфекционных агентов [13, 14], т. е. в случае заражения. Следует подчеркнуть, что в данных условиях усиление респираторной активности носит не патологический (колебания параметра не выходили за пределы интервала нормы адаптивного реагирования), а защитный характер, оцениваемый при стимуляции клеток in vitro.

Аналогично НСТ-тесту, характеризующему кислород-зависимый механизм бактерицидной окислительной активности, К.Ф. Хамидуллиной и соавт. [7] показано достоверное дозозависимое увеличение показателей стимулированной зимозаном люминол-зависимой хемилюминесценции фагоцитов в присутствии тимогена (при минимальной и максимальной дозировке). Также авторами отмечено усиление продукции перекиси водорода нейтрофилами и моноцитами в тесте по свечению дихлорфлуоресцеина: моноцитами на 50 %, нейтрофилами - на 80 %. Таким авторами, показано положительное влияние тимогена на функциональную активность фагоцитов периферической крови.

В дополнение к НАДФ-оксидазной системе фагоцитов в противоинфекционную защиту включаются антимикробные белки и пептиды [гистоны, дефензины, лизоцим, лактоферрин, BPI-белок (bactericidal/permeability-increasing protein - бактерицидный белок, повышающий проницаемость), серпроцидины - гомологи сериновой протеазы (нейтрофильная эластаза, катепсин G, протеиназа-3 и азуроцидин)], причем, они, как правило, являются катионными полипептидами [9, 15], расположенными в азурофильных и секреторных гранулах нейтрофилов, которые совместно с матриксными металлопротеиназами (ММП - желатиназы, коллагеназы), кислыми фосфатазами и гидролазами реализуют бактерицидную активность нейтрофилов через анаэробные механизмы [8-10, 13, 14, 16, 17]. Показано, что хемокины моноцитов и макрофагов также являются катионными белками, которые, по аналогии с дефензинами, обладают антимикробной активностью [15, 18].

При хронических и затяжных заболеваниях бронхолегочной системы у больных может наблюдаться сниженный или близкий к норме уровень антимикробных белков фагоцитов. Так, отмечено, что у больных туберкулезом легких уровень катионных белков не выходит за пределы нормальных значений [10], тогда как после проведения интенсивной и поддерживающей терапии наблюдали существенный рост уровня антимикробных белков лизосом.

Полученные нами результаты ЛКТ свидетельствуют о том, что препарат Цитовир®-3 способствует повышению уровня лизосомальных катионных белков в течение всего курса приема, что имеет протективное значение, поскольку способствует более эффективному киллингу микроорганизмов по кислород-независимому пути при их попадании в фаголизосому с одновременным формированием адаптивного иммунного ответа (инаппарантной сероконверсии) на фрагменты микроорганизма (бактерии, вируса и т.д.) без развития манифестного заболевания.

Наши результаты согласуются с ранее полученными экспериментальными данными В. С. Смирнова и соавт. по дозозависимому повышению содержания лизоцима и миелопероксидазы (МП3) в сыворотке крови мышей в 2-6 раз по сравнению с данными контроля (изотонический раствор NaCl) с максимумом на 3-й день после однократного введения субстанции Цитовир®-3 [19]. Также автор показал дозозависимый подъем выживаемости мышей до 96 % при заражении вирулентным штаммом B. fragilis животных, предварительно однократно получивших перорально препарат, что свидетельствует о повышении резистентности организма к вирусным и бактериальным инфекциям. В контрольной группе выживаемость была достоверно ниже и не превышала 50 %.

Таким образом, препарат Цитовир®-3 усиливает потенциальную готовность нейтрофилов противостоять возможному вторжению патогена посредством активации кислород-независимых и кислород-зависимых НАДФ-Н-оксидазных респираторных реакций, обеспечивающих основную микробицидную активность, демонстрируя свое профилактическое действие в исследовании у добровольцев.

Следующий этап работы - оценка гуморального иммунного ответа с определением общего сывороточного IgA и sIgA слюны. При респираторных инфекциях первой линией защиты являются слизистые оболочки верхних дыхательных путей, в которых активируются факторы врожденного и адаптивного иммунного ответа. Частью этого адаптивного ответа является выработка антител против патогена, включая IgA. Общий сывороточный IgA проявляет системную активность и служит субстратом для синтеза секреторной фракции. sIgA составляет основную часть иммуноглобулинов, входящих с состав секретов слизистых оболочек. Секреторные IgA играют важную роль, инактивируя патогены (респираторные вирусы, в том числе грипп) на поверхности слизистой оболочки верхних дыхательных путей. Описана нейтрализующая активность sIgA [20, 21].

Снижение уровня IgA, в том числе в слюне, способствует росту респираторных заболеваний и гриппа. В двойном слепом клиническом исследовании Y. Yamamoto и соавт. показали положительное влияние потребления йогурта с Lactobacillus bulgaricus OLL1073R-1 у пожилых людей с ослабленным иммунитетом на повышение уровня общего IgA и sIgA в слюне, специфичного по отношению к штамму гриппа А/И3№, что помогает предотвратить заражение вирусом [34]. В другом исследовании статистически значимое снижение сывороточного IgA наблюдали в острый период ротавирусной инфекции у детей в отличие от здоровых детей группы сравнения [23].

За последний год опубликовано множество работ, посвященных SARS-CoV-2, проникающему в организм через слизистую оболочку дыхательных путей, и описывающих определение продукции специфического IgA, имеющего фундаментальное значение для защиты слизистой оболочки [24]. В случае SARS-CoV-2 sIgA-антитела могут предотвращать адгезию вируса к целевым эпителиальным клеткам слизистой оболочки дыхательных путей за счет блокирования S-белка коронавируса или связывания с белком нуклеокапсида SARS-CoV-2 [21]. Несколько исследований COVID-19 показали наличие специфических сывороточных IgA против SARS-CoV-2, выявляемых с 4-5-го дня заболевания [25, 26].

Учитывая тот факт; что сывороточная фракция IgA является субстратом для формирования sIgA, выявленное в нашем исследовании повышение содержания данного компонента в слюне может служить подтверждением активации процессов, обеспечивающих резистентность слизистой оболочки верхних отделов респираторного тракта [24]. Эти результаты хорошо коррелируют с полученными ранее данными о клинической и профилактической эффективности препарата при его курсовом применении [27-29]. Так, в клиническом исследовании препарата Цитовир®-3 у здоровых детей от 6 лет и старше, применяемого для профилактики гриппа и ОРВИ, показано статистически значимое увеличение уровня sIgA в слюне после курсового применения в течение 12 дней [28, 30]. В другом клиническом исследовании для лечения гриппа и ОРВИ у детей применяли препарат Цитовир®-3 в виде порошка и сиропа в течение 4 дней, и также было показано статистически значимое увеличение секреции sIgA после курсового приема на фоне исходно сниженных показателей [10].

Цитовир®-3 в капсулах 7-дневным курсом успешно применяли при лечении COVID-19 в составе комплексной терапии (азитромицин и плаквенил). Описан клинический случай терапии медицинского работника НМИЦ ТО им. Р.Р. Вредена с нормализацией температуры тела на 3-и сутки со значительным разрешением пневмонических очагов (по данным компьютерной томографии), быстрой редукцией клинико-лабораторных проявлений COVID-19 как при первичном инфицировании, так и в случае суперинфекции [32]. Недавняя работа профессора В.С. Смирнова и академика А.А. Тотоляна также предполагает научно обоснованное использование препарата Цитовир®-3 в комплексной этиопатогенетической терапии коронавирусной инфекции [33].

Заключение

При инфекциях дыхательных путей, в том числе при гриппе и ОРВИ, чаще всего угнетенными оказываются поглотительная и функциональная активность фагоцитов - клеток врожденного иммунитета. В клиническом исследовании препарата Цитовир®-3 в капсулах выявлено активирующее влияние препарата на показатели фагоцитарной системы: стимулированной окислительной НСТ-активности и уровня лизосомальных катионных белков, повышение уровня фагоцитоза. Также отмечено усиление продукции sIgA, что в совокупности раскрывает механизмы профилактического действия препарата. Таким образом, по результатам клинического исследования показаны иммунотропное действие, безопасность и хорошая переносимость пролонгированного курса приема (14 дней) препарата Цитовир®-3 в отношении ряда показателей, определяющих усиление резистентности организма к возбудителям респираторных инфекций, что имеет клиническую значимость как при профилактическом, так и при лечебном применении данного лекарственного средства.

Вклад авторов

Сбор и обработка материала - Попова В.В., Лёвина А.В., Краснов А.А.; анализ данных отчета по клиническому исследованию, написание текста - Рулева А. А.; редактирование - Краснов А.А., Петленко С.В.

МКБ-10

1. Андрюков Б.Г., Сомова Л.М., Дробот Е.И., Матосова Е.В. Защитные стратегии нейтрофильных гранулоцитов от патогенных бактерий. Здоровье. Медицинская экология. Наука. 2017; 1 (68): 4-18.

2. Аралова Е.В., Куприна Н.П., Покатаева Н.И., Кокорева С.П., Сахарова Л.А. Клинико-иммунологические особенности острых бронхитов у детей. Детские инфекции. 2008; 3: 28-30.

3. Дуда А.К., Коцюбайло Л.П. Современная иммунотропная терапия больных коронавирусными инфекциями. Актуальная инфектология. 2016; 3 (12): 33-7.

4. Ерофеева М.К., Позднякова М.Г., Головачева Е.Г. Сравнительная клиническая эффективность лекарственных средств неспецифической профилактики гриппа и ОРВИ у детей в период сезонного подъема заболеваемости. Журнал инфектологии. 2020; 12 (2): 63-70.

5. Ким К.Ф. Влияние синтетических аналогов пептидов тимуса на продукцию цитокинов и фагоцитарную активность клеток периферической крови : автореф. дис. - канд. мед. наук. Москва, 2004.

6. Петленко С.В., Осидак Л.В., Смирнов В.С., Стукань Н.И., Афанасьева О.И., Головачева Е.Г. Сравнительная клинико-лабораторная эффективность препаратов для патогенетического лечения острых респираторных вирусных инфекций. Вопросы вирусологии. 2016; 61 (6): 263-9.

7. Петленко С.В., Смирнов В.С., Руденко В.В. Течение внутригоспитальной коронавирусной инфекции (COVID-19) на фоне профилактического и лечебного приема пептидных иммунотропных препаратов в составе комплексной терапии. Формулы фармации. 2020; 2 (3): 8-13.

8. Пигаревский В.Е. Лизосомально-катионный тест : методические рекомендации. Москва, 1979.

9. Савлевич Е.Л., Бродовская О.Б., Ремизова И.И., Чистякова Г.Н., Ищенко А.М., Симбирцев А.С. Клинико-иммунологическая эффективность применения новой аэрозольной формы рекомбинантного интерферона α2b в лечении больных с острыми назофарингитами. Цитокины и воспаление. 2010; 9 (1): 49-56.

10. Смирнов В.С., Петленко С.В., Осидак Л.В., Стукань Н.И., Лёвина А.В., Малахова Е.А., Мешкова М.Е. Сравнительная клинико-лабораторная оценка различных препаратов для этиопатогенетической терапии гриппа и ОРВИ. Российский иммунологический журнал. 2017; 11 (20) (2): 230-1.

11. Смирнов В.С. Цитовир-3 повышает активность гуморальных факторов системы врожденного иммунитета. Российский аллергологический журнал. 2012; 1 (1): 293-4.

12. Смирнов В.С., Зарубаев В.В., Петленко С.В. Биология возбудителей и контроль гриппа и ОРВИ. Санкт-Петербург, 2020: 338 с.

13. Смирнов В.С., Петленко С.В. Грипп и острые респираторные вирусные инфекции. Санкт-Петербург : Гиппократ, 2019: 248 с.

14. Смирнов В.С., Тотолян А.А. Некоторые возможности иммунотерапии при коронавирусной инфекции. Инфекция и иммунитет. 2020; 10 (3): 446-58.

15. Тихомирова А.Р., Рулева А.А. Клинико-иммунологическая эффективность отечественного иммунотропного препарата у детей при острых респираторных инфекциях с бронхообструктивным синдромом. Иммунология. 2020; 41 (3): 249-55.

16. Филинюк О.В., Земляная Н.А., Стрелис А.К., Уразова О.И., Воронкова О.В., Шевцова Н.М., Есимова И.Е. Цитохимическая и микробицидная активность фагоцитов крови у больных туберкулезом легких. Бюллетень сибирской медицины. 2007; 1: 62-7.

17. Чеснокова Н.П., Понукалина Е.В., Невважай Т.А., Жевак Т.Н., Бизенкова М.Н. Лекция 3. особенности структуры, функции и метаболизма моноцитов крови и мононуклеарно-фагоцитирующей системы тканей. Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. 2015; 4-2: 290-2.

18. Шипицын К.С., Огарков П.И., Смирнов В.С., Жоголев С.Д., Жоголев К.Д. Профилактика острых респираторных вирусных инфекций и пневмоний в организованном коллективе. Эпидемиология и инфекционные болезни. 2010; 1: 57-61.

19. Agha N.H., Baker F.L., Kunz H.E., Spielmann G., Mylabathula P.L., Rooney B.V., Mehta S.K., Pierson D.L., Laughlin M.S., Markofski M.M., Crucian B.E., Simpson R.J. Salivary antimicrobial proteins and stress biomarkers are elevated during a 6-month mission to the International Space Station. J. Appl. Physiol. 2020; 128 (2): 264-75.

20. Cooper G.E., Pounce Z.C., Wallington J.C., Bastidas-Legarda L.Y., Nicholas B., Chidomere C., Robinson E.C., Martin K., Tocheva A.S., Christodoulides M., Djukanovic R., Wilkinson T.M., Staples K.J. Viral inhibition of bacterial phagocytosis by human macrophages: redundant role of CD36. PLoS One. 2016; 11 (10): e0163889.

21. García L.F. Immune response, inflammation, and the clinical spectrum of COVID-19. Front. Immunol. 2020; 11: 1441.

22. Kobayashi S.D., Malachowa N., DeLeo F.R. Neutrophils and bacterial immune evasion. J. Innate Immun. 2018; 10 (5-6): 432-41.

23. Levy O. Antimicrobial proteins and peptides: anti-infective molecules of mammalian leukocytes. J. Leukoc. Biol. 2004; 76 (5): 909-25.

24. Ma H., Zeng W., He H., Zhao D., Jiang D., Zhou P., Cheng L., Li Y., Ma X., Jin T. Serum IgA, IgM, and IgG responses in COVID-19. Cell. Mol. Immunol. 2020; 17 (7): 773-5.

25. Okba N.M.A., Müller M.A., Li W., Wang C., Geurtsvan-Kessel C.H., Corman V.M., Lamers M.M., Sikkema R.S., de Bruin E., Chandler F.D., Yazdanpanah Y., Le Hingrat Q., Descamps D., Houhou-Fidouh N., Reusken C.B.E.M., Bosch B.J., Drosten C., Koopmans M.P.G., Haagmans B.L. Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2-specific antibody responses in coronavirus disease patients. Emerg. Infect. Dis. 2020; 26 (7): 1478-88.

26. Rajasekaran G., Dinesh Kumar S., Nam J., Jeon D., Kim Y., Lee C.W., Park I.S., Shin S.Y. Antimicrobial and anti-inflammatory activities of chemokine CXCL14-derived antimicrobial peptide and its analogs. Biochim. Biophys. Acta Biomembr. 2019; 1861 (1): 256-67.

27. Saito S., Sano K., Suzuki T., Ainai A., Taga Y., Ueno T., Tabata K., Saito K., Wada Y., Ohara Y., Takeyama H., Odagiri T., Kageyama T., Ogawa-Goto K., Multihartina P., Setiawaty V., Pangesti K.N.A., Hasegawa H. IgA tetramerization improves target breadth but not peak potency of functionality of anti-influenza virus broadly neutralizing antibody. PLoS Pathog. 2019; 15 (1): e1007427.

28. Смирнов В.С., Савельев С.А., Петленко С.В., Редлих Г., Ерофеева М.К., Лёвина А.В., Завьялова Н.И. Открытое сравнительное исследование безопасности и эффективности препаратов "Цитовир-3" и "Арбидол" при профилактике детей в период сезонного подъема заболеваемости респиторными вирусными инфекциями. Инфекция и иммунитет. 2019; 9 (2): 273-8. DOI: https://doi.org/10.15789/2220-7619-2019-2-273-278

29. Smiyan O.I., Smiian-Horbunova K.O., Bynda T.P., Loboda A.M., Popov S.V., Vysotsky I.Y., Moshchych O.P., Vasylieva O.G., Manko Y.A., Ovsianko O.L., Kolesnikova M.V., Dolgova N.O., Aleksakhina T.O., Al-Rawashdeh B. Optimization of the treatment of rotavirus infection in children by using bacillus clausii. Wiad. Lek. 2019; 72 (7): 1320-3.

30. Teng T.S., Ji A.L., Ji X.Y., Li Y.Z. Neutrophils and Immunity: From Bactericidal Action to Being Conquered. J. Immunol. Res. 2017; 2017: 9671604. Epub 2017 Feb 19. DOI: https://doi.org/10.1155/2017/9671604

31. Varadhachary A., Chatterjee D., Garza J., Garr R.P., Foley C., Letkeman A.F., Dean J., Haug D., Breeze J., Traylor R., Malek A., Nath R., Linbeck L. Salivary anti-SARS-CoV-2 IgA as an accessible biomarker of mucosal immunity against COVID-19. medRxiv. 2020; Aug 11: 2020.08.07.20170258. DOI: https://doi.org/10.1101/2020.08.07.20170258

32. Wiesner J., Vilcinskas A. Antimicrobial peptides: the ancient arm of the human immune system. Virulence. 2010; 1 (5): 440-64.

33. Xingyuan C., Chen Q. Serum BPI as a novel biomarker in asthma. Allergy Asthma Clin. Immunol. 2020; 16: 50.

34. Yamamoto Y., Saruta J., Takahashi T., To M., Shimizu T., Hayashi T., Morozumi T., Kubota N., Kamata Y., Makino S., Kano H., Hemmi J., Asami Y., Nagai T., Misawa K., Kato S., Tsukinoki K. Effect of ingesting yogurt fermented with Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus OLL1073R-1 on influenza virus-bound salivary IgA in elderly residents of nursing homes: a randomized controlled trial. Acta Odontol. Scand. 2019; 77 (7): 517-24.