Иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие туляремийные сухие (Immunoglobulins diagnostic fluorescent tularemia dry)

Препарат представляет собой, меченную флуоресцеин-5-изотиоцианатом (ФИТЦ) иммуноглобулиновую фракцию туляремийной сыворотки, полученной гипериммунизацией лошадей убитыми туляремийными микробами.

Сухой препарат - аморфная масса желто-оранжевого цвета: после растворения - опалесцирующая жидкость желтозеленого цвета, не имеет осадка.

1. Приготовление препаратов для люминесцентной микроскопии.

Мазки из бактериальной суспензии, из материалов от трупов, рвотных масс и др. готовят тонкими на обезжиренных стеклах по 3 из каждого объекта исследования. Мазки-отпечатки из органов животных делают, прикладывая предметное стекло к поверхности свежего среза исследуемого органа. Наличие на предметных стеклах кусочков тканей и органов недопустимо. Затем мазки подсушивают на воздухе и фиксируют этиловым спиртом в течение 20 мин. затем вновь подсушивают на воздухе.

2. Методика окраски мазков флуоресцирующими иммуноглобулинами.

Сухие флуоресцирующие иммуноглобулины растворяют в 0,5 мл дистиллированной воды. После растворений препарат можно хранить в пробирке с резиновой пробкой при температуре 2-1 СС не более 14 суток.

Непосредственно перед нанесением на мазок, флуоресцирующие иммуноглобулины необходимо развести 0,9 % раствором натрия хлорида соответствии с указанным на этикетке рабочим разведением. Препарат в рабочеу разведении хранить не следует.

На фиксированные мазки наносят каплю флуоресцирующих иммуноглобулинов в рабочем разведении и помещают во влажную камеру (чашки Петри с увлажненной фильтровальной бумагой или ватой). Через 20-25 мин мазки промывают проточной водопроводной водой или трижды сменяемым 0,9 % раствором натрия хлорида, споласкивают дистиллированной водой и просушивают на воздухе. На готовые мазки наносят каплю раствора глицерина (9 объемных частей глицерина и одна часть фосфатного буферного раствора РН 7,5*) и накрывают покровным стеклом.

Люминесцентная микроскопия

Люминесцентную микроскопию мазков проводят с помощью микроскопов типа МЛ-2, МЛД, ЛОМАМ и др. под иммерсионным объективом, применяя иммерсионное нефлуоресцирующее масло (nD²⁰=1,515) Для получения наиболее яркой флуоресценции бактерий, следует тщательно центрировать осветительную систему микроскопа. Рекомендуется применять светофильтры возбуждающего света ФС-1-2, СС15-2, БС-8-2, запирающий светофильтр Т-2-Н, объектив 90, аппертура 1,25, окуляр 10 ^х , сила тока 4-4,5 А.

Степень яркости флуоресценции бактерий, «окрашенных» флуоресцирующими иммуноглобулинами, принято обозначать по четырехкрестной системе:

4 креста - сверкающая флуоресценция желтовато-зеленого цвета оболочки микробной клетки, четко контрастируемая с темным телом клетки;

З креста - яркая флуоресценция желтовато-зеленого цвета оболочки микробной клетки;

2 креста и 1 крест - слабое свечение всей клетки.

Специфическим считается свечение с яркостью 4 или 3 креста, свечение с яркостью 2 или 1 крест принято считать неспецифическим. Обнаружение во всем препарате (при просмотре 30 и более полей зрения ) хотя бы единичных, специфически светящихся бактериальных клеток, флуоресценция которых оценивается на 4 или З креста, дает основание для положительного ответа.

Отрицательный результат свидетельствует о полном отсутствии возбудителя туляремии, или о содержании его в исследуемом материале в низкой концентрации, не выявляемой иммунофлуоресцентным методом при прямом исследовании пробы без обогащения или подращивания.

Хранить препараты в соответствии с СП 3.32.1248-03 при температуре не выше 10 ⁰ С.

Транспортировать в соответствии с СП 3.3 2.1248-03. Допускается транспортирование при температуре от 1 1 ⁰ до 25 ⁰ С в течение не более 7 суток.